产品目录

本试剂盒用简便快速的方法可以从各种植物样本中提取叶绿体蛋白和植物膜蛋白，提取过程简单方便，可在一小时内提取得到高质量的叶绿体蛋白和膜蛋白。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、叶绿体膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（HR0389）。

本试剂盒采用非酶法提取，提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，而且绝少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法较低。酶法提取制备的蛋白，回收率稍有提高，蛋白纯度高，保持天然活性，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒。请根据实际需要选择试剂盒。

• 将蛋白提取的时间缩短至1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

• 提取液准备：
  每500μL冷的蛋白提取液C和D中分别加入1μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  
• 取新鲜植物样本叶片，用纯水或PBS洗净擦干后去除叶梗和粗脉。
  
• 用手术剪刀尽可能剪碎。
  
• 每500mg～1g新鲜植物叶片样本中加入2mL提取液A，用匀浆机充分匀浆或用Dounce匀浆器充分匀浆。
  注：
  ● 匀浆尽可能充分。至无明显可见固体。
  ● 培养细胞直接收集细胞后用Dounce匀浆器匀浆即可，匀浆后加提取液A混匀后直接进行以下步骤离心。
  ● 处理叶片等组织样本如果没有匀浆机，也可先加少量提取液A后用Dounce匀浆器充分匀浆后再加提取液A混匀。
  
• 将匀浆用100μm细胞筛过滤。
  注：
  ● 没有细胞筛时可以不过滤，将匀浆液静置1分钟，待大的没有破碎的组织块自然沉降，吸取上清。
  ● 部分黏液较多的植物样本可能难以吸取，可以将1mL吸头的口剪掉一点再吸。
  
• 将滤液800×g力离心3分钟。将上清（I）移入另一干净离心管，留沉淀（I）待用。
  
• 将上清（I）2000×g力离心10分钟。收集沉淀（II）。将上清（II）吸出加入沉淀（I）中重悬沉淀（I），留重悬液（A）进行步骤11待用。
  
• 在步骤7沉淀（II）中加入200μL提取液B，充分混匀后，在2～8℃振荡20分钟。
  注：
  ● 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体有轻微晃动即可。
  ● 没有低温振荡条件可以不振荡，在2～8℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
  
• 将提取液在4℃，12000×g条件下离心5分钟，取上清，弃沉淀。
  
• 即得叶绿体蛋白。
  
• 在重悬液（A）中加入80μL提取液C，充分混匀，置2～8℃振荡1～2小时。
  注：
  ● 此步骤必须保持低温条件下振荡。
  ● 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体有轻微晃动即可。
  ● 没有低温振荡条件可以不振荡，在2～8℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
  
• 在37℃水浴10分钟。
  
• 在37℃，1000×g离心2分钟。
  注：
  ● 此步骤必须37℃条件下离心。
  ● 如果离心机不可控温，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液分层清晰即可。或者在室温条件下离心，缩短离心时间至1分钟。
  
• 此时溶液分为两层，小心移除上层，保留下层溶液，下层体积大约50μL左右。
  
• 在下层液体中加入1～2倍体积的溶解液D，即得植物膜蛋白样品。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂CD的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。